Трихомонада вагіналіс (Trichomonas vaginalis), кількісне визначення ДНК збудника методом ПЛР (зішкріб, сеча)

Аналіз на трихомонаду вагіналіс (кількісне визначення ДНК методом ПЛР) – один з прямих методів діагностики статевих інфекцій, а саме – урогенітального трихомоніазу. Метод ПЛР заснований на ампліфікації – багаторазовому збільшенні кількості копій фрагмента ДНК збудника під дією ферменту ДНК-полімерази. Метод відрізняється високою чутливістю – досить, щоб в біологічному матеріалі пацієнта (сечі, зішкребі) містився невеликий фрагмент ДНК збудника, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) дозволяє накопичити його в кількості, достатній для виявлення. При позитивному результаті (якщо ДНК збудника виявлена) здійснюється кількісна оцінка (враховується концентрація генетичного матеріалу в зразку).

Що потрібно знати про кількісне визначення ДНК Trichomonas vaginalis

Trichomonas vaginalis (трихомонада вагіналіс) – найпростіший одноклітинний паразит, який колонізує органи сечостатевої системи (у чоловіків слизову оболонку уретри, у жінок – піхви й уретри, зрідка – інші органи). Трихомонади відносяться до справжніх патогенів і викликають інфекційне захворювання – трихомоніаз, який є найбільш поширеним ЗПСШ. Джерелом трихомонадної інфекції може бути хворий або носій збудника, зараження відбувається переважно статевим шляхом, можлива передача інфекції від матері дитині під час вагітності та в процесі пологів. Випадки зараження контактно-побутовим шляхом рідкісні, оскільки поза людським організмом збудник швидко гине.

У жінок Trichomonas vaginalis виявляється переважно в репродуктивному віці (16-35 років), в разі внутрішньоутробного зараження дівчаток збудник зазвичай персистує в організмі, не викликаючи симптомів, і активізується в період статевого дозрівання. У 10-50% жінок трихомоніаз має безсимптомний перебіг, у інших проявляється генітальним свербінням, болісними сечовипусканнями, виділеннями зі статевих органів з інтенсивним неприємним запахом. У більшої частини інфікованих чоловіків (60-70%) клінічні симптоми відсутні, до класичних клінічних проявів відносяться симптоми уретриту (легкий свербіж, помірні білуваті пінисті виділення з уретри), іноді – болісне сечовипускання.

Безсимптомний трихомоніаз небезпечний тим, що носій є джерелом інфекції, але не підозрює про це, а через відсутність лікування можуть розвинутись ускладнення. У жінок запальний процес може вражати шийку матки (цервіцит), сечовипускальний канал (уретрит), слизову оболонку піхви (вагініт). У чоловіків у рідкісних випадках запалення поширюється на простату, придатки яєчок. Захворювання трихомоніазом підвищує ризик зараження іншими статевими інфекціями, може призвести до безпліддя, ускладнень вагітності.

У зв'язку з частими випадками безсимптомного перебігу та неспецифічною клінічною симптоматикою ключова роль в діагностиці трихомоніазу відводиться лабораторним аналізам. Для діагностики цього захворювання застосовуються мікроскопічні, цитологічні, культуральні, серологічні та молекулярно-генетичні дослідження. Мікроскопічне виявлення мікроорганізмів типу Trichomonas vaginalis утруднене, при використанні культурального методу (бакпосіву) для отримання результатів потрібно не менше тижня. З серологічних досліджень найбільш інформативним є аналіз на антитіла класу IgG, антитіла інших класів при трихомоніазі не завжди виявляються через низькі імуногенні властивості Trichomonas vaginalis.

Сьогодні «золотим стандартом» діагностики є ПЛР-дослідження, яке поєднує високу специфічність, чутливість і можливість швидкого отримання результатів. При кількісному визначенні ДНК збудника після кожного циклу ампліфікації концентрація генетичного продукту в досліджуваному зразку порівнюється з калібратором (зразком, концентрація ДНК в якому точно відома).

Коли та навіщо призначається аналіз на трихомонаду вагіналіс (кількісне визначення ДНК збудника методом ПЛР)

Молекулярно-генетичний аналіз на трихомонаду вагіналіс з кількісним визначенням ДНК призначається:

• при симптомах гострого запального процесу сечостатевої системи;
• при хронічних захворюваннях органів сечостатевої системи;
• якщо у пацієнта діагностовано інші ЗПСШ;
• при високому ризику зараження статевими інфекціями;
• якщо трихомоніаз діагностований у статевого партнера;
• при безплідді, ускладненнях вагітності, передчасних пологах, народженні дитини з недостатньою масою тіла в анамнезі;
• при плануванні вагітності;
• після завершення курсу антибіотикотерапії при трихомоніазі.

ПЛР-дослідження з кількісним визначенням ДНК Trichomonas vaginalis проводиться для:

• виявлення носіїв трихомонади вагіналіс, діагностики безсимптомного трихомоніазу, профілактики його ускладнень та попередження поширення інфекції;
• диференціальної діагностики ЗПСШ;
• підтвердження або виключення ролі Trichomonas vaginalis у розвитку запального процесу сечостатевої системи, призначення адекватної терапії;
• виявлення або виключення супутньої трихомонадної інфекції при підтвердженій гонореї;
• оцінки ефективності антибактеріальної терапії трихомоніазу;
• з'ясування причин безпліддя, ускладнень вагітності.

Аналіз може виконуватися за призначенням венеролога, гінеколога, уролога.

Як підготуватися до аналізу на трихомонаду вагіналіс (ПЛР-дослідження з кількісним визначенням ДНК в сечі, зішкребі)

Незалежно від статі пацієнта та біологічного матеріалу, який використовується для ПЛР-дослідження, воно повинно проводитися до початку антибактеріальної терапії або мінімум через 3 тижні після її завершення. Місцеве застосування антибактеріальних, протигрибкових лікарських препаратів необхідно відмінити за 2 тижні до дослідження. Жінкам рекомендується здавати аналіз перед менструацією або через 3-4 дні після її завершення.

Правила підготовки до забору урогенітального зішкребу:

• за 3 дні до взяття зішкребу утримуватися від статевих контактів;
• жінкам протягом 3 діб напередодні не спринцюватися, не застосовувати вагінальних препаратів і не користуватися тампонами;
• напередодні не застосовувати засоби інтимної гігієни з бактерицидним ефектом;
• чоловікам протягом 2-3 годин перед взяттям зішкребу утриматися від сечовипускання;
• взяття зішкребу виконується до або мінімум через 3 години після проведення туалету зовнішніх статевих органів;
• у жінок урогенітальний зішкріб береться до мануального гінекологічного обстеження та трансвагінальних інструментальних діагностичних процедур (або мінімум через добу після).

Правила підготовки до збору сечі стандартні – напередодні рекомендується виключити гострі, солоні страви й алкоголь, безпосередньо перед збором виконати ретельний туалет зовнішніх статевих органів. Для ПЛР-дослідження використовується перша порція (50-60 мл) ранкової сечі.

Інтерпретація результатів аналізу на трихомонаду вагіналіс з кількісним визначенням ДНК

Результат аналізу може бути позитивним або негативним, при позитивному результаті вказується концентрація ДНК – кількість копій на мл.

Можливі причини негативного результату (ДНК не виявлена, 0 копій):

• відсутність Trichomonas vaginalis в організмі;
• відсутність у досліджуваному зразку фрагментів ДНК або вміст нижче порогу чутливості тест-системи;
• хибнонегативний результат – наявність у зразку інгібітора полімеразної ланцюгової реакції.

Негативний результат аналізу на трихомонаду вагіналіс у поєднанні з симптомами урогенітального запалення, ЗПСШ вказує на те, що захворювання викликане іншим збудником.

Позитивний результат вказує на інфікування Trichomonas vaginalis, дозволяє підтвердити етіологічну роль цього патогена в розвитку запального процесу, виникненні клінічних проявів. З урахуванням кількісних показників і особливостей клінічної картини лікар може диференціювати гостру, хронічну, латентну інфекцію.

Важливі зауваження

При позитивному результаті аналізу (незалежно від кількісних показників) обов'язково проводиться обстеження на трихомоніаз статевого партнера пацієнта.

При трихомоніазі існує високий ризик реінфекції, для виключення або виявлення якої необхідно здати повторний аналіз через 3 місяці після успішного завершення лікування (отримання негативного результату).

Переваги ПЛР-дослідження з кількісним визначенням ДНК Trichomonas vaginalis у лабораторії Ніколаб

Для діагностики трихомоніазу методом ПЛР у лабораторії Ніколаб застосовуються високочутливі тест-системи, передова методика дозволяє в стислі терміни отримати інформативний результат. Також у лабораторії можна здати інші аналізи для діагностики трихомоніазу.